Умови культивування бактерій
Для культивування бактерій необхідно дотримуватися ряду умов.
– Наявність повноцінної живильного середовища. Кожна живильне середовище незалежно від складності складу і мети застосування (див. Розділ 3.1) повинна володіти водною основою, органічним джерелом вуглецю та енергії, визначеним рН, осмотичним тиском.
– Температура культивування. Температура впливає на швидкість розмноження. Для підтримки необхідної температури використовують спеціальні прилади – термостати.
– Атмосфера культивування. Для росту і розмноження строгих аеробів необхідний кисень. Аероби добре ростуть на поверхні агару на чашках Петрі або в тонкому верхньому шарі рідкого середовища. Для забезпечення росту і розмноження строгих аеробів в глибинних шарах рідкого середовища необхідно дифузне розподіл кисню по всьому об’єму живильного середовища. Це досягається безперервним перемішуванням або струшуванням живильного середовища, тобто аерування. Аерування здійснюється на спеціальних апаратах – струшувачі.
Для культивування факультативних анаеробів використовують ті ж методи, так як у присутності кисню у них переважає оксидативний метаболізм над ферментацією як найбільш енергетично вигідний.
Мікроаерофіли розмножуються при зниженому парціальному тиску кисню. Цього можна досягти підвищенням парціального тиску СО2 в атмосфері культивування до 1-5% проти 0,03% СО2 в атмосфері повітря. Для цих же цілей використовують спеціальні СО2-інкубатори або ж посіви поміщають в ексикатори, в яких встановлюють запалену свічку.
Облігатні анаероби для свого росту і розмноження вимагають виключення доступу кисню повітря. Це досягається наступними заходами:
– Додаванням до живильних середовищ редукуючих кисень речовин: тиогликолевой і аскорбінової кислот, цистеїну, сульфідів;
– Регенерацією від кисню повітря рідких поживних середовищ шляхом їх кип’ятіння з наступним щільним закупорюванням судин, в які налиті середовища, гумовими пробками;
– Використанням поглиначів кисню, лужного пірогалолу, та інших засобів, поміщаючи їх в герметично закриваються ємності газ-паки. Цей метод використовується для культивування аеротолерантнимі бактерій;
– Механічним видаленням кисню повітря з подальшим заповненням ємності інертним газом (для цих цілей використовують анаеростатах та анаеробні бокси).
Для культивування хемо – і фотоавтотрофні бактерій створюється атмосфера, насичена СО2.
– Час культивування залежить від часу генерації. Більшість бактерій культивують для одержання видимого
Зростання протягом 18-48 ч. Для культивування збудника коклюшу потрібно 5 діб, для культивування М. tuberculosis – 3-4 тижнів.
– Освітлення. Для вирощування фототрофних мікроорганізмів необхідне світло. Деякі умовно-патогенні мікобактерії в залежності від освітленості утворюють пігмент, що використовується при їх ідентифікації. Культивування абсолютних внутрішньоклітинних паразитів, бактерій, що відносяться до пологів Rickettsia, Ehrlichia, Coxiella, Chlamydia, здійснюють на культурах клітин або в організмі тварин і членистоногих, а також у курячих ембріонах (за винятком Ерліха). Курячі ембріони використовують також для культивування бактерій, що володіють високим рівнем гетеротрофно, наприклад пологів Borrelia, Legionella.
(1 votes, average: 5.00 out of 5)