Ферментний імуносорбентний аналіз
Існує цілий ряд підходів, що дозволяють визначити, чи відбулася зв’язка антитіла з антигеном-мішенню. Один з них – це ферментний іммуносорбентний аналіз (ELISA), який часто використовують для діагностики. Процедура включає наступні етапи.
1. Зразок, в якому хочуть виявити специфічну молекулу або мікроорганізм, фіксують на твердій підкладці, наприклад на пластиковій мікротитрувального плашці зазвичай має 96 лунок.
2. До фіксованому зразком додають антитіло, специфічне до маркерною молекулі (перше антитіло), потім промивають лунку, щоб видалити Незв’язана молекули першого антитіла.
3. Додають друге антитіло, яке специфічно зв’язується з першим антитілом і не взаємодіє з маркерною молекулою. До цього антитілу приєднаний фермент (наприклад, лужна фосфатаза, пероксидаза або уреаза), що каталізує перетворення незабарвленого субстрату в забарвлений продукт. Промивають лунку, щоб видалити Незв’язана молекули кон’югата друге антитіло-фермент.
4. Додають незабарвлений субстрат.
5. Проводять якісне або кількісне визначення забарвленого продукту.
Якщо перше антитіло не зв’язується з мішенню зразка, то воно віддаляється при першому промиванні. Оскільки при цьому кон’югату друге антитіло-фермент не з чим зв’язуватися, він видаляється при другому промиванні, і зразок залишається незабарвленим. Якщо зв’язування з мішенню відбувається, то друге антитіло приєднується до першого, і кон’югований фермент каталізує утворення легко реєстрованого забарвленого продукту.
Основний принцип ELISA – специфічне зв’язування першого антитіла з мішенню. Якщо молекула-мішень являє собою білок, то його очищений препарат зазвичай використовують для отримання антитіл, за допомогою яких потім і виявляють дану мішень. Антитіла, які утворюються в сироватці (антисироватки) крові імунізованих тварини (зазвичай кролика), зв’язуються з різними антигенними детермінантами (епітопами) молекули-мішені. Таку суміш антитіл називають поліклональним препаратом. Використання поліклональних антитіл має два недоліки, істотних для деяких методів діагностики: 1) зміст окремих антитіл в Поліклональні препараті може варіювати від однієї партії до іншої; 2) поліклональні антитіла не можна застосовувати, якщо необхідно розрізнити дві подібні мішені, т. Е. Коли патогенна (мішень) та непатогенна (Не-мішень) форми розрізняються єдиною детермінантою. Однак ці проблеми цілком вирішувані, оскільки зараз навчилися отримувати препарати антитіл, вироблених до однієї антигенної детермінанті, т. Е. Препарати моноклональних антитіл.
Related posts:
- Аналіз ІФА Імуноферментний аналіз (ІФА) – це лабораторне дослідження, засноване на реакції “антиген-антитіло”. Суть цього лабораторного методу – виявлення специфічних антитіл за допомогою спеціальних біохімічних реакцій, які допомагають визначити присутність або відсутність антитіл і їх кількість. Методом ІФА можна визначити рівень гормонів, імуноглобулінів, імунологічних комплексів та інших біологічно активних речовин. Матеріалом для дослідження може служити кров (ІФА […]...
- Будова імуноглобулінів (на прикладі молекули імуноглобуліну G) За своєю хімічною будовою імуноглобуліни – це глікопротеїди. За фізико-хімічними та антигенними властивостями імуноглобуліни діляться на класи: G; M; A; E; D. Молекула імуноглобуліну G побудована з двох важких (Н-ланцюгів) і двох легких поліпептидних ланцюгів (L-ланцюги). Кожий поліпептидний ланцюг складається з варіабельної (V), стабільної (константної, С) і так званої шарнірної частин. Важкі ланцюги імуноглобулінів різних […]...
- Клітинний і плюральний імунітет У клітинному імунітеті, або клітинної захисту, беруть участь лейкоцити і клітини ретикуло-ендотеліальної системи. Лейкоцити володіють амебоідним рухом, що дозволяє їм захоплювати і перетравлювати чужорідні клітини і відмерлі клітини даного організму. Поглинання і внутрішньоклітинний перетравлювання мікробів, чужорідних і відмерлих клітин організму на називається фагоцитозу. Цей феномен відкрив І. І. Мечников. Основна участь у фагоцитозі беруть нейтрофіли, […]...
- Специфічний імунітет Специфічний імунітет – спосіб захисту організму від живих тіл і речовин, що несуть в собі ознаки генетичної чужорідності. Він забезпечується імунною системою – сукупністю лімфоїдних органів, тканин і клітин, макрофагами разом з продуктами їх життєдіяльності. Ці органи називаються імунокомпетентними. Специфічний імунітет проявляється в імунній відповіді, який здійснюється двома системами. Т-система забезпечує клітинний противірусний і протипухлинний […]...
- Специфічна імунна система Специфічна імунна система є найбільш потужною та ефективною. При проникненні в організм антигену клітини специфічної імунної системи починають виробляти антитіла і антитоксини, які з’єднуються з антигенами і нейтралізують їх шкідливий вплив на організм. Антитіла, або імунні тіла, являють собою циркулюють у крові білкові речовини (імуноглобуліни), що утворюються в організмі під впливом потрапили в нього чужорідних […]...
- Моноклональні антитіла, іммуноаналіз Моноклональні антитіла Моноклональні антитіла (МАТ) секретируются імунними клітинами, які походять від єдиної антітелообразующіх клітини. Тому МАТ спрямовані тільки проти певного епітопів імуногенною речовини, так званої “антигенної детермінанти”. Для отримання МАТ ізолюють лімфоцити з селезінки імунізованих миші (1) і виробляють їх злиття з пухлинними клітинами миші (клітинами мієломи) (2). Це необхідно, тому що життєздатність антителопродуцирующих лімфоцитів […]...
- Сумісність крові і тканин Біологічна сумісність – схожість будови тканинних білків донора і реципієнта. Переливання крові проходить без ускладнень при сумісності антигенів, або агглютиногенов, донора і реципієнта (детальніше про сумісність груп крові читайте статтю “Аглютинація еритроцитів”). Антигени є в усіх органах і тканинах, але у кожної людини вони неповторно поєднуються. Тому пересаджувати органи і тканини можна тільки при їх […]...
- Структура імуноглобулінів Антитіла (імуноглобуліни) – це білки, які синтезуються під впливом антигену і специфічно з ним реагують. Вони складаються з поліпептидних ланцюгів. У молекулі імуноглобуліну розрізняють чотири структури: 1) первинну – це послідовність певних амінокислот. Вона будується з нуклеотидних триплетів, генетично детермінується і визначає основні наступні структурні особливості; 2) вторинну (визначається конформацией поліпептидних ланцюгів); 3) третинну (визначає […]...
- Пасивний імунітет Іноді людині вводять готові антитіла, вироблені іншим організмом. Такий імунітет називають пасивним. Він діє недовго, так як введені антитіла швидко виводяться з організму. Людині, хворій на дифтерію, вводять антитіла, вироблені в організмі коня. Щоб їх отримати, спочатку коня вводять ослаблений дифтерійний отрута. У відповідь у неї відбувається імунна реакція. У крові накопичуються антитіла. Після цього […]...
- Мікробіологічний синтез каучуку Натуральний каучук, цис-1,4-поліізопрен, – це широко використовуваний біополімер, який отримують з різних рослин. Його біосинтез починається з перетворення простих цукрів і включає 17 ферментативних реакцій. В ході останньої з них відбувається полімеризація ізопентенілпірофосфата з утворенням аллілпірофосфата. Зважаючи на велику комерційної цінності каучуку були проведені дослідження, спрямовані на те, щоб з’ясувати, чи можна використовувати для його […]...
- Резус-фактор Резус-фактор – це антиген, який міститься в еритроцитах людини і макаки-резусу. Виявлено К. Ландштейнером і ін. В 1940 р в крові людей за допомогою сироваток тварин, імунізованих еритроцитами макаки-резусу. За хімічною природою – ліпопротеїд. Передається у спадок і не змінюється протягом життя. Частота народження резус-фактора у європеоїдів – 85%, у монголоїдів – 99%. За наявністю […]...
- Імуноферментний метод або аналіз ІФА – найбільш поширений сучасний метод, який використовується для діагностики вірусних, бактеріальних, протозойних інфекцій, зокрема для діагностики ВІЛ-інфекції, вірусних гепатитів та ін. Модифікацій ІФА дуже багато. Широко використовується твердофазний неконкурентний варіант ІФА. Його проводять у 96-лункових полістиролових планшетах (тверда фаза). При проведенні реакції необхідно на кожному етапі відмивати прореагували компоненти. При визначенні антитіл у лунки, […]...
- Особливості імунітету при протозойних інвазіях Паразитарна інвазія супроводжується формуванням в макроорганізмі гуморального і клітинного імунітету. У крові визначаються специфічні антитіла класів M і G, які найчастіше не володіють протективного властивістю. Однак вони активують АЗКЦТ за участю макрофагів, а в разі внутрішньоклітинного паразитування – природних кілерів і γδT лімфоцитів. Паразитарні інвазії соспровождаются аллергизацией макроорганізму за механізмом ГЗТ. Характер протипаразитарного імунітету визначається […]...
- Гени і білки Відомо, що всі ферменти є білками і каталітична активність ферменту визначається його білкової частиною і додатковими кофакторами. Білки, що складаються з амінокислот, які з’єднуються між собою Аміна і карбоксильних кінцями, називаються поліпептидами. Каталітична активність ферменту залежить від кількості і типу входять до нього амінокислот, порядку їх розташування по ланцюгу, кількості ланцюгів і характеру їх взаємного […]...
- Реакції II типу (цитотоксичні) Алергічні реакції II типу опосередковані антитілами до поверхневих антигенів клітини або до вдруге пов’язаним з клітинної поверхнею антигенів. Провідна роль належить антитілам, здатним активувати систему комплементу (IgM, IgG1-3). Крім комплементзавісімой цитотоксичности, сюди можна також віднести антителозависимую клітинно-опосередковану цитотоксичність, що не потребує комплементу. Антитіла, які беруть участь у цитотоксичних реакціях, специфічні для поверхневих АГ клітинної мембрани […]...
- Методи імунодіагностики Багато імунологічні системи детекції володіють високою чутливістю і специфічністю, будучи в той же час досить простими. Вони широко використовуються для тестування лікарських препаратів, оцінки моніторингу різних онкологічних захворювань, визначення специфічних метаболітів, ідентифікації та контролю патогенних мікроорганізмів, але мають і свої обмеження. Якщо молекулою-мішенню є білок. то необхідно забезпечити експресію детерміпірующіх його генів і створити умови, […]...
- Сумісність по групам крові і резус-фактору У крові існують два типи аглютинінів і два типи агглютиногенів. Агглютіногени позначають великими латинськими літерами – А і В, а відповідні аглютиніни – малими – а й б. Існують чотири основні групи крові. Для переливання найкраще використовувати кров тієї ж групи, що і кров потерпілого; іноді можна користуватися кров’ю інших груп, якщо в ній не […]...
- Пептидні вакцини Далі виникає наступне питання: чи може невелику ділянку білкової молекули (домен) служити ефективною суб’едінічной вакциною і індукувати вироблення антитіл? Інтуїтивно здається, що ті домени, які доступні для антитіла (т. Е. Ті, які знаходяться на поверхні вірусу), володіють імуногенні властивості, а внутрішні домени несуттєві, якщо тільки вони не впливають на конформацію імуногенною домену. Якщо це припущення […]...
- Пасивний імунітет: визначення і види Головну роль в захисті організму відіграє набутий імунітет, який починає складатися ще з дитинства. Виділяють придбаний активний і пасивний імунітет. Визначення Імунітет виробляється в результаті зіткнення імунних клітин крові – лейкоцитів – з ворожими об’єктами – антигенами. До антигенів відносяться будь-які сторонні речовини і мікроорганізми – бактерії, віруси, найпростіші. Існує два види імунітету: Вроджений, обумовлений […]...
- Групи крові У наші дні переливання крові широко застосовується в повсякденній практиці і рятує тисячі людських життів. У всіх великих лікарнях є запас крові різних груп для негайного використання у разі потреби. Однак ще в минулому столітті переливання крові здавалося нездійсненним. Хоча такі спроби іноді робилися, вони лише в рідкісних випадках були успішними; дуже часто виникали важкі […]...
- Що таке фагоцитоз? Фагоцитоз – це процес, при якому клітина зв’язується з необхідною часткою на поверхні, а потім обволікає і занурює її в всередину. Процес фагоцитозу часто відбувається, коли клітина намагається знищити щось, наприклад вірус або інфіковану клітину, і часто використовується клітинами імунної системи. Фагоцитоз не відбудеться, якщо клітина не знаходиться у фізичному контакті з часткою, яку вона […]...
- Що таке генна інженерія? Генна інженерія, яку називають також молекулярним або генним клонуванням, – це лабораторний метод, що включає штучну рекомбінацію молекул нуклеїнових кислот, вбудовування рекомбінантної молекули в векторну систему (вірусну частку, бактеріальну плазміду і ін.) І подальше впровадження химерних молекул в організм господаря, де вони продовжують розмножуватися. Конструювання таких молекул називають також генним маніпулюванням, оскільки воно зазвичай супроводжується […]...
- Білки, Амінокислоти Білки – це високомолекулярні речовини органічної природи, що складаються зі структурних елементів – амінокислот. За рахунок наявності білків в організмі здійснюються побудова різних клітинних і позаклітинних структурних елементів, транспорт різних речовин (транспортні білки крові, транспортні білки мембран і т. Д.), Регуляція різних обмінних процесів в організмі (гормони). Білки виконують захисну функцію, що пов’язано з білковою […]...
- Незернисті лейкоцити Незернисті лейкоцити мають велике округле ядро, яке може займати майже всю клітину, і не містять в цитоплазмі гранул. Існує два типи цих клітин, вони подібні за зовнішнім виглядом, але відрізняються за походженням і функцій. Лімфоцити – найдрібніші з лейкоцитів: за розміром вони трохи більше еритроцитів. Вони утворюються в лімфатичних вузлах, розташованих по ходу лімфатичних судин. […]...
- Життєдіяльність і розмноження клітин Клітини рослин, тварин і людей мають багато спільного. Це найскладніші хімічні лабораторії, в яких відбувається безліч перетворень. Більшість з них здійснюють білки-каталізатори, або ферменти. Каталізатор – це речовина, здатна в тисячі разів прискорювати реакцію, маса якого до і після реакції практично не змінюється, каталізатор бере участь лише в проміжних реакціях і в кінці звільняється повністю. […]...
- Реакції III типу (Імунокомплексні) Алергічні реакції III типу опосередковані імунними комплексами, які утворюються при преципітації в невеликому надлишку антигену. В залежності від кількості та імуногенності антигену іноді відбувається відкладення утворилися імунних комплексів в тканинах. Біологічні властивості таких комплексів обумовлені співвідношенням антигену і антитіл. Імунні агрегати, що утворилися при значному надлишку антигену, мають малі і середні розміри і можуть володіти […]...
- Аналіз деяких труднощів Хтось може запитати, чи завжди компанія може оцінити граничні надходження від кожного фактора виробництва. Особливо важкі наступні два приклади. По-перше, в деяких випадках, таких, як робота секретарів, вчителів і т. д., не існує чітко визначених і негайно одержуваних фізичних продуктів – результату їх роботи. Як тут можна виміряти граничний фізичний продукт і тим самим граничні […]...
- Дифузія в фізиці: визначення Це – процес проникнення молекул однієї речовини між молекулами іншої речовини. Говорячи простою мовою, цей процес можна назвати змішуванням. Під час цього змішування відбувається взаємне проникнення молекул речовини один між одним. Наприклад, при приготуванні кави молекули розчинної кави проникають в молекули води і навпаки. Швидкість цього фізичного процесу залежить від наступних факторів: Температура. Агрегатний стан […]...
- Механізм дії ферментів Провідну роль у механізмі ферментативного каталізу відіграє освіта фермент-субстратні комплексів, на існування яких було вказано в 1902 р (Д. Браун). – На першій фазі ферментативного каталізу між субстратом і ферментом виникає з’єднання, в якому реагенти пов’язані один з одним іонної, ковалентного чи іншого виду зв’язком. – Потім друга фаза – субстрат під дією приєднаного до […]...
- Чи можна здавати аналіз крові під час місячних? Відповідь також буде різним, залежно від того, здаєте ви плановий або терміновий аналіз крові. Плановий однозначно краще перенести. Якщо ви здаєте терміновий аналіз крові (під час захворювання), то, надавши його результати лікаря, обов’язково попередьте його про те, в який період циклу був проведений забір крові. Бажано також попередити лікаря і в момент виписки напрямки, оскільки […]...
- Генетичний аналіз Сукупність методів вивчення спадковості отримала назву “генетичний аналіз”. Його основа – гибридологический метод, розроблений Г. Менделем. З відкриття законів успадкування Г. Менделем і починається історія генетики. Не менша заслуга у становленні цієї науки належить Т. Моргану і його школі. Можна вважати, що ці вчені заклали фундамент генетики як науки. Гибридологический метод, розроблений Г. Менделем, показав, […]...
- Хімічні реакції: приклади і аналіз Під час хімічних реакцій з одних речовин утворюються інші (не плутати з ядерними реакціями, в яких один хімічний елемент перетворюється в інший). Реагенти – це речовини, які вступають в хімічну реакцію. Продукти реакції – це речовини, які отримані після хімічної реакції. Будь-яка хімічна реакція описується хімічним рівнянням: Реагенти → Продукти реакції Стрілка вказує напрямок протікання […]...
- Антитілозалежна клітинно-опосередкована цитотоксичність АЗКЦТ реалізується завдяки експресії на мембрані імунокомпетентних клітин рецепторів до Fc-фрагменту молекули імуноглобуліну (FcR). Ці рецептори є трансмембранними білковими молекулами і специфічні до певного ізотипу важкого ланцюга молекули Ig, пов’язаної в імунний комплекс. Тому розпізнавання чужорідних клітин відбувається за допомогою FcR по антитіл, які попередньо зв’язалися з поверхневими антигенами клітин-мішеней. АЗКЦТ можуть здійснювати активовані макрофаги, […]...
- Аналіз вірша Пушкіна “Спалений лист” Вірш “Спалений лист” було написано Пушкіним в 1825 році, в той час як він перебував у Михайлівській посиланням. Воно присвячене Єлизаветі Воронцової, з якою він познайомився в 1823 році в Одесі. Ще свіжі були сліди їх забороненого кохання. Єлизавета Ксаверівна була заміжньою жінкою, і тому завжди веліла Пушкіну спалювати її листи. Ця традиція послужила назвою […]...
- Розміри молекул і атомів Розмір атомів і молекул можна оцінити за допомогою наступного досвіду. Крапни на поверхню води маленьку краплю олії. Воно з часом розтечеться по поверхні води дуже тонким шаром (рис. 5.3). Наприклад, крапелька оливкової олії об’ємом 1 мм3 розтікається по площі близько 1 м2. Товщина найтоншою масляної плівки приблизно дорівнює розміру молекули масла. Виходячи з цього оцінимо […]...
- Малярійний плазмодій Починаючи з 1960-х років по всьому світу поширилися штами малярійного плазмодія, стійкі до хлорохіну – лікам, яке раніше було найефективнішим протималярійних засобом. Хлорохін вперше синтезували в 1934 році. Завдяки своїй ефективності і дешевизні він незабаром став головною зброєю медиків у боротьбі з малярією, відтіснивши хінін та інші препарати на другий план. Але вже через чверть […]...
- Збудники урогенітальних мікоплазмозів і уреаплазмоза До збудників урогенітальних мікоплазмозів відносять Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma genitalium і Mycoplasma fermentans. Епідеміологія. Джерело інфекції – інфікована людина. Мікоплазми, що викликають урогенітальні захворювання, передаються статевим шляхом. Можливі вертикальний шлях передачі, а також інфікування плода під час пологів при проходженні через інфіковані родові шляхи. Патогенез та клінічна картина. Вхідними воротами інфекції є слизова оболонка […]...
- Чим відрізняється аналіз від оцінки Аналіз і оцінка застосовуються в багатьох областях діяльності. Без них не обходиться жодне наукове дослідження. Чим відрізняються ці важливі поняття одне від одного? Спробуємо розібратися. Що таке аналіз і оцінка Аналіз – протилежний синтезу метод, що складається в уявному або реальному поділі цілого, складного на прості елементи; всебічне, детальний розгляд, вивчення факту, події або явища. […]...
- Спадкова інформація і генетичний код Такі ознаки живого, як самовідтворення, спадковість і мінливість проявляється вже на молекулярно-генетичному рівні. Вони пов’язані з певними органічними речовинами і зі спадковою (генетичною) програмою організму. ДНК і гени. До початку 50-х рр. XX ст. вчені припустили, що основна функція генів полягає у визначенні структури білків, в першу чергу – білків-ферментів. Численні дослідження показали, що в […]...
- Якісний елементарний аналіз органічних речовин При дослідженні якісного складу чистих органічних сполук найчастіше доводиться зустрічатися з невеликим числом елементів. Це – вуглець, водень, кисень, азот, сірка, галоїди і фосфор. Відкриття всіх цих елементів, крім водню і кисню, засноване на переведенні їх у розчинні у воді іонізуючої з’єднання, аналізовані із застосуванням відповідних реакцій, добре відомих з неорганічної хімії. Водень ж відкривається […]...