Визначення амінокислотного складу білка
Перший етап у визначенні первинної структури білків полягає в якісній і коічественной оцінці амінокислотного складу даного індивідуального білка. Необхідно пам’ятати, що для дослідження потрібно мати певну кількість чистого білка, без домішок інших білків або пептидів.
Кислотний гідроліз білка
Для визначення амінокислотного складу необхідно провести руйнування всіх пептидних зв’язків в білку. Аналізований білок гід-Роліз в 6 мовляв / л HCl при температурі близько 110 ° С протягом 24 ч. У результаті такої обробки руйнуються пептидні зв’язку в білку, а в гідролізаті присутні тільки вільні амінокислоти. Крім того, глутамін і Аспара-гін гідролізуються до глутамінової та Аспара-гіновой кислот (тобто розривається амидная зв’язок в радикалі і від них відщеплюється аминогруппа).
Поділ амінокислот за допомогою хроматографії
Суміш амінокислот, отриманих кислотним гідролізом білків, поділяють в колонці з ка-тіонообменной смолою. Така синтетична смола містить міцно пов’язані з нею негативно заряджені групи (наприклад, залишки сульфоновой кислоти-S03 ~), до яких приєднані іони Na + (рис. 1-4).
У катіонообменнік вносять суміш амінокислот у кислому середовищі (pH 3,0), де амінокислоти в основному представляють катіони, тобто несуть позитивний заряд. Позитивно заряджені амінокислоти приєднуються до негативно зарядженим частинкам смоли. Чим більше сумарний заряд амінокислоти, тим міцніша її зв’язок зі смолою. Так, амінокислоти лізин, аргінін і гістидин найбільш міцно зв’язуються з катіонообмінники, а аспарагінова і гли-тамінових кислоти-найбільш слабо.
Вивільнення амінокислот з колонки здійснюють вимиванням (елюювання) їх буферним розчином з збільшується іонною силою (тобто із збільшенням концентрації NaCl) і pH. При збільшенні pH амінокислоти втрачають протон, в результаті зменшується їх позитивний заряд, а отже і міцність зв’язку з негативно зарядженими частинками смоли.
Кожна амінокислота виходить з колонки при певному значенні pH і іонної сили. Збираючи з нижнього кінця колонки розчин (елюат) у вигляді невеликих порцій, можна отримати фракції, що містять окремі амінокислоти.
Кількісний аналіз отриманих фракцій
Кількість кожної з амінокислот в даному білку визначають, нагріваючи окремі фракції амінокислот з нінгідрином, утворюючим з’єднання червоно-фіолетового кольору. Інтенсивність забарвлення в пробі пропорційна кількості
Знаходиться в ній амінокислоти, тому по Спектрофотометричні вимірюванню світла, поглиненого Нінгідринова похідними, можна визначити зміст кожної амінокислоти в гідролізаті даного білка.
В даний час процес поділу та кількісного визначення амінокислот в гідролізаті білка повністю автоматизований і здійснюється в спеціальному приладі-аминокислотном аналізаторі.
Related posts:
- Біосинтез білка Біосинтез білка – це один з видів пластичного обміну, в ході якого спадкова інформація, закодована в генах ДНК, реалізується в певну послідовність амінокислот у білкових молекулах. Генетична інформація, знята з ДНК і перекладена в код молекули і-РНК, має реалізуватися, тобто проявитися в ознаках конкретного організму. Ці ознаки визначаються білками. Біосинтез білків відбувається на рибосомах в […]...
- Біосинтез білка: біохімія В процесі біосинтезу білка слід розрізняти два послідовних процесу: транскрипцію і трансляцію. При транскрипції генетична інформація, ув’язнена в молекулі ДНК, листується завдяки дії транскриптази в інформаційну РНК (іРНК). У цитоплазмі на рибосомах іРНК визначає порядок з’єднання амінокислот, здійснюючи таким чином синтез специфічного білка. Цей процес називається трансляцією, в ньому можна виділити кілька послідовних етапів: активацію […]...
- До чого сниться білка Білка є символом суєти, занепокоєння, запасливості і легковажності. Білка не сидить на одному місці і все робить рвучко, але без старання. Коли приснилася білка, то це може означати, що скоро несподівано вас відвідають старі друзі. Зустріч буде бурхливою, марного і недовгою, тому залишить вас в розгубленості і подиві. Якщо бачити в сні білку, гризучий горіхи, […]...
- Білки: характеристика та властивості Які речовини називаються білками або протеїнами? Білки, або протеїни, являють собою біологічні полімери, мономерами яких є амінокислоти. Всі амінокислоти мають аміногрупу (-NH2) і карбоксильну групу (-СООН) і розрізняються будовою і властивостями радикалів. Амінокислоти пов’язані між собою пептидними зв’язками, тому білки називають ще поіипептидами. Що таке первинна структура білка? У молекулі білка амінокислоти пов’язані один з […]...
- Біосинтез білка – загальна характеристика Білки – єдині органічні речовини клітини (крім нуклеїнових кислот), біосинтез яких здійснюється під прямим контролем її генетичного апарату. Сама збірка білкових молекул здійснюється в цитоплазмі клітини і являє собою багатоетапний процес, для якого потрібні певні умови і ряд компонентів. Умови та компоненти біосинтезу білка. Біосинтез білка залежить від діяльності різних видів РНК. Інформаційна РНК (іРНК) […]...
- Синтез білка і його дозрівання Синтез білка в шорсткою ЕПР Біосинтез білка [трансляція мРНК (mRNA)] завжди починається в цитоплазмі (1). Певна послідовність з 15-60 амінокислот на початку ланцюга, що позначається як сигнальний пептид, вказує місце синтезу (див. С. 232). Якщо утворюється на рибосомі білок починається з сигнального пептиду (2), що орієнтує білок на шорсткий ендоплазматичнийретикулум (Шер), з ним зв’язується РНК-містить […]...
- Методи отримання амінокислот Вісім амінокислот організм тварин не може синтезувати, тому їх називають біологічно незамінними амінокислотами. До них відносяться фенілаланін, ізолейцин, лейцин, лізин, метіонін, треонін, триптофан і валін. Ці амінокислоти повинні регулярно і в потрібній кількості надходити в організм разом з харчовими продуктами. Недолік однієї з цих амінокислот в їжі може стати фактором, що лімітує ріст і розвиток […]...
- Яку функцію виконують рибосоми Призначення описуваного органоїда в будь-якій клітині полягає в здійсненні синтезу білків. Білки використовуються практично всіма клітинами: В якості каталізаторів – прискорюють час реакції; В якості волокон – забезпечують стабільність клітини; Багато білків мають індивідуальні завдання. Основним сховищем інформації в клітинах служить молекула дезоксирибонуклеїнової кислоти (ДНК). Спеціальний фермент, РНК-полімераза, зв’язується з молекулою ДНК і створює “дзеркальну […]...
- Повідомлення на тему “Білка” Всім з дитинства відомо, що білка – це дика тварина, але є випадки, коли людина заводив собі білку як домашню тварину. Ця маленька симпатична білочка завоювала серця всіх людей на землі. Тіло у пухнастиків дуже струнке, на вухах пензлика і великий пухнастий хвіст. Довжина тіла цієї тварини приблизно від двадцяти до сорока сантиметрів. Вага білки […]...
- Генетика: визначення Генетика – це біологічна наука, що вивчає гени, спадковість та мінливість живих організмів. Перші закономірності генетики людство помітило на зорі свого розвитку. Наприклад, дуже швидко перші люди зрозуміли, чим кращі характеристики рослини, дав насіння (наприклад, злакового), тим краще і якісніше буде урожай, який з нього виросте. Те ж саме стосувалося домашніх тварин – для розмноження […]...
- Синтез білка і РНК Принцип комплементарності лежить також в основі транскрипції. Синтез молекули РНК здійснює фермент – РНК-полімераза. Використовуючи ДНК як матрицю, РНК-полімераза рухається по ній у напрямку від 3 до 5 кінця і будує комплементарних ланцюг. Швидкість транскрипції – приблизно 50 нуклеотидів в секунду. Молекули РНК набагато коротше молекул ДНК, тому кожна молекула ДНК служить матрицею для синтезу […]...
- Первинна структура білків Амінокислотні залишки в пептидного ланцюга білків чергуються не випадковим чином, а розташовані в певному порядку. Лінійну послідовність амінокислотних залишків у поліпептидному ланцюзі називають ” первинна структура білка “. Первинна структура кожного індивідуального білка закодована в ділянці ДНК, званому геном. У процесі синтезу білка інформація, що знаходиться в гені, спочатку переписується на мРНК, а потім, використовуючи […]...
- Білки, Амінокислоти Білки – це високомолекулярні речовини органічної природи, що складаються зі структурних елементів – амінокислот. За рахунок наявності білків в організмі здійснюються побудова різних клітинних і позаклітинних структурних елементів, транспорт різних речовин (транспортні білки крові, транспортні білки мембран і т. Д.), Регуляція різних обмінних процесів в організмі (гормони). Білки виконують захисну функцію, що пов’язано з білковою […]...
- Будова білків – коротко Беки відносяться до лінійних полімерів. У їх складі можуть бути присутні кілька α-аміокіслот і неаміноктслотні компоненти. На перший погляд все 20 амінокислот – це невеликий вибір. Але насправді молекула білка, що складається всього з 5 компонентів амінокислот, може мати понад мільйон варіантів побудови. Невеликий білок може мати в своїй ланцюжку сотню амінокислотних залишків. При синтезі […]...
- Матричні біосинтези Синтез нерегулярних лінійних полімерів – білків і нуклеїнових кислот – відбувається матричним способом. Тільки таким чином можна точно відтворити послідовність мономерів в полімерній молекулі. При синтезі ДНК матрицями служать кожна з ланцюгів “материнської” молекули ДНК. Вибір потрібних нуклеотидів для будівництва нового ланцюга здійснюється за принципом їх комплементарності. Результатом синтезу є дві подвійні “дочірні” спіралі, кожна […]...
- Білка летяга – опис і характеристика Парити між густими кронами білку дають можливість великі перетинки, які знаходяться безпосередньо між задніми і передніми лапами. Завдяки своїм перетинкам (жорстким шкірним складкам) тварина в буквальному сенсі зависає в повітрі, вміло переміщаючись, таким чином, з гілки на гілку або з одного дерева на інше. Наприклад, здійснюючи стрибок з реліктової сосни, що підноситься на кілька десятків […]...
- Повідомлення на тему “Білка-летяга” Білка – летяга дуже схожа на звичайну білку, але є істотні відмінності. Летягою її назвали, тому що на відміну від звичайної білки, вона здатна в стрибку долати великі відстані, за рахунок так званої “летючості”. Вся справа в тому, що між лапками знаходиться шкірна перетинка, і при здійсненні стрибка вона використовується як парашут. В результаті, коли […]...
- Склад і будова білків До складу білків входять: вуглець, водень, азот, кисень; сірка. Частина білків утворює комплекси з іншими молекулами, що містять фосфор, залізо, цинк і мідь. Білки становлять 10-20% від сирої маси і 50-80% від сухої маси клітини. Білки – високомолекулярні органічні речовини, нерегулярні полімери, мономерами яких є залишки амінокислот. До складу більшості білків входять 20 різних амінокислот […]...
- Особливості хімічного складу клітин бактерій Зміст Морфологія клітинної стінки Капсула Морфологія цитоплазми Рибосоми Джгутики Спори Відмінності вірусів від бактерій Бактеріальна клітина є повноцінним живим організмом. Щоб розуміти, як відбувається організація обмінних процесів у ній, необхідно знати хімічний склад клітин бактерій. Хімічний склад бактеріальної клітини для побудови білків, вуглеводів і ліпідів включає такі елементи: азот, водень, кисень, вуглець. Якщо брати кількісне […]...
- Доповідь на тему “Білка-летяга” На планеті Земля існує величезна різноманітність живих організмів. Кожен з них унікальний по-своєму. Хтось живе у воді, хтось на суші, а хтось ширяє в повітрі. Серед останніх є, як і птиці, так і ссавці. На жаль ссавців, які здатні пересуватися за допомогою, польоту вкрай мало. До таких тварин відноситься білка-летяга. Білка-летяга ставитися до виду гризунів […]...
- Білки – загальна характеристика Одними з найбільш важливих органічних компонентів живого є білки. Друге їх назва – протеїни (від грец. Протос – перший). Білки – полімери з великою молекулярною масою від декількох десятків до декількох мільйонів одиниць. Їх мономерами служать амінокислоти. Кількість амінокислот у молекулах різних білків може коливатися від 3-5 до кількох тисяч. Наприклад, молекула білка рібонуклеази складається […]...
- Визначення потреби в складській площі і ємності складу Визначення потреби в складській площі і ємності складу: 1. Sn = N * Q (1 спосіб), де: Q – товарний запас, що підлягає зберіганню на складі; N – норматив складкою площі, не менше 1 млн руб. товарного запасу. 2. Qmax = (O * K): (365 * C), де: О – річний товарообіг на складі по […]...
- Альбуміни і глобуліни Фарбування білків сироватки крові і подальша процедура денситометрії дозволяють отримати 5 фракцій білків, іменованих по швидкості їх руху як альбумін, α1-, α2-, β – і γ-глобуліни (рис. 1.4). Кожна з фракцій глобулінів містить декілька специфічних білків. Процедура ЕФ дозволяє встановити: – зниження вмісту альбуміну; – збільшення однієї або декількох фракцій глобулінів; – поява фракції глобулінів, […]...
- Перетравлювання і всмоктування білків Перетравлення білків починається в шлунку. Пепсин гідролізує 10 – 15% білків їжі. Ендопептідази (трипсин, хімотрипсин) розщеплюють білки до поліпептидів; екзопептідази отщепляют амінокислоти. Під впливом ендо – і екзопептідази панкреатичного соку і ферментів щіткової облямівки еритроцитів поліпептиди і оліго-пептиди розщеплюються до амінокислот, які транспортуються через мембрану в цитозоль клітин епітелій. Частина оліго-пептидів піддається внутрімембранному переварюванню, расщепляясь […]...
- Денатурація білків Розрив великої кількості слабких зв’язків в молекулі білка призводить до руйнування її нативної конформації. Так як розрив зв’язків під дією різних факторів носить випадковий характер, то молекули одного індивідуАльного білка набувають у розчині форму випадково сформованих безладних клубків, що відрізняються один від одного тривимірною структурою. Втрата нативної конформації супроводжується втратою специфічної функції білків. Цей процес […]...
- Спадкова інформація і генетичний код Такі ознаки живого, як самовідтворення, спадковість і мінливість проявляється вже на молекулярно-генетичному рівні. Вони пов’язані з певними органічними речовинами і зі спадковою (генетичною) програмою організму. ДНК і гени. До початку 50-х рр. XX ст. вчені припустили, що основна функція генів полягає у визначенні структури білків, в першу чергу – білків-ферментів. Численні дослідження показали, що в […]...
- Ізоелектрична точка поліамфоліта Білки належать до поліамфоліта, тобто до речовин, здатним залежно від умов проявляти властивості як підстав, так і кислот. Залишки йоногенних амінокислот (аспарагінової та глутамінової кислот, аргініну, лізину і гістидину) можуть перебувати як у прото-лося, так і в депротонованої формах. Стан, при якому сумарний заряд поліамфоліта дорівнює нулю, називається ізоелек-тричним. Значення pH розчину, відповідне Ізоелектрична станом, […]...
- Азотиста рівновага Білки, що складаються з амінокислот, – це основні з’єднання, яким властиві процеси життя. Тому винятково важливий облік обміну білків і продуктів їх розщеплення. Вміст азоту в білках складає в середньому 16 % їхньої маси. Тому, визначивши кількість азоту, що надійшов в організм з їжею, і кількість азоту в складі сечі, поту і калу, можна розрахувати […]...
- Пластичний обмін речовин Суть пластичного обміну полягає в тому, що з простих речовин, що надходять в клітину ззовні, утворюються речовини клітини. Розглянемо цей процес на прикладі освіти найважливіших органічних сполук клітини – білків. У синтезі білка – цьому складному, многоступенчатом процесі – беруть участь ДНК, мРНК, тРНК, рибосоми, АТФ і різноманітні ферменти. Початковий етап білкового синтезу – утворення […]...
- Що таке біосинтез білка Спочатку варто ознайомитися з визначенням біосинтезу. Біосинтезу називається синтез живими організмами природних органічних сполук. Якщо бути простіше, то це отримання різних речовин за допомогою мікроорганізмів. Цей процес займає важливу роль у всіх живих клітинах. Не забуваємо і про складне біохімічному складі. Транскрипція і трансляція Це два найважливіших кроку біосинтезу. Транскрипція з латинської означає “переписування” – […]...
- Біосинтез амінокислот В атмосфері елементарний азот (Ν2) присутня практично в необмеженій кількості. Перш ніж надійти в кругообіг азоту, він повинен бути відновлений до NH3 і включений (“фіксований”) в амінокислоти. А. Симбиотическая фіксація азоту Фіксувати атмосферний азот здатні лише деякі види бактерій і синьо-зелених водоростей. Вони знаходяться в грунті вільно або живуть у симбіозі з рослинами. Особливо важливе […]...
- Де живе білка летяга? Білка летяга є володаркою дуже м’якого і густого вовняного покриву, який рятує її практично від будь-яких холодів. Забарвлення спинки у більшості особин – сріблясто-попелястий, в рідкісних випадках бурого відтінку. Черевна область світліша, і частіше за все буває попелястої або сірого забарвлення. Де живе білка летяга? Для тваринного дуже важливу роль відіграє наявність кедрів, беріз та […]...
- Характеристика активного центру білків Активний центр білка-відносно ізольований від навколишнього білок середовища ділянку, сформований амінокислотними залишками. У цьому ділянці кожен залишок завдяки своєму індивідуальним розміром і функціональних групах формує ” рельєф ” активного центру. Об’єднання таких амінокислот в єдиний функціональний комплекс змінює реакційну здатність їх радикалів, подібно до того, як змінюється звучання музичного інструменту в ансамблі. Тому амінокислотні залишки, […]...
- Ген і генетичний код Поняття “ген”. Білки – найважливіший компонент живої клітини, вони складають найбільшу за масою частина органічних речовин клітини і забезпечують унікальність її хімічного складу, структурної організації та функціональної активності. Клітини кожного організму мають свій специфічний набір білків. Він відрізняється від набору білків, характерного для клітин іншого організму. Інформація про те, які білки повинні синтезуватися в клітинах […]...
- Білки і субстати Визначення вмісту загального білка плазми (сироватки) крові – елемент комплексу профілактичних та лікувальних заходів вже на початковому етапі надання медичної допомоги. Більшість білків плазми крові синтезовано в гепатоцитах. Катаболізм багатьох білків плазми крові відбувається в ендотеліальних клітинах капілярів і системі функціональних фагоцитів – моноцитів і макрофагів – після поглинання білків шляхом піноцитозу. Білки з невеликою […]...
- Будова пептиду Кількість амінокислот у складі пептидів може сильно варіювати. Пептиди, що містять до 10 амінокислот, називають олігопептиди. Часто в назві таких молекул вказують кількість входять до складу олигопептида амінокислот : трипептид, пентапептид, октапептид і т. д. Пептиди, що містять більше 10 амінокислот, називають ” поліпептвди “, а поліпептиди, що складаються з більш ніж 50 амінокислотних залишків, […]...
- Доповідь на тему “Білка” Білка – маленький звір, який більшу частину свого життя проводить на висоті, пересуваючись по кронах дерев і гілок. Іноді спускається для того, щоб знайти їжу, що впала на землю. Наприклад, горіхи, жолуді, гриби. Їжу свою вони складують і зберігають в дуплах, щоб збереглися запаси на зиму. Таким чином вони сушать гриби, нанизуючи їх на гілочки […]...
- Замінні і незамінні амінокислоти Амінокислоти – складні органічні речовини, що складаються з вуглеводневого радикала, який може включати сірку або фосфор, і двох функціональних груп – NH2 і – COOH. За ознакою виділяють замінні і незамінні амінокислоти. Амінокислоти Амінокислоти – мономери, що складаються з вуглеводнів, азоту і кисню. Деякі сполуки містять сірку, фосфор і деякі інші елементи. Це похідні карбонових […]...
- Де утворюються рибосоми Складові частини органоїда утворюються в ядерці. Дві субодиниці об’єднуються для початку хімічного процесу синтезу білка з ланцюга мРНК. Рибосома діє як каталізатор, утворюючи пептидні зв’язку між амінокислотами. Використана тРНК вивільняється назад в цитозоль, в подальшому вона може зв’язуватися з іншого амінокислотою. Органоїд досягне стоп-кодону мРНК (UGA, UAG і UAA), зупинивши процес синтезу. Спеціальні білки (фактори […]...
- Характеристика пептидного зв’язку Пептидная зв’язок має характеристику частково подвійного зв’язку, тому вона коротше, ніж інші зв’язку пептидного кістяка, і внаслідок цього мало рухлива. Електронна будова пептидного зв’язку визначає плоску жорстку структуру пептидного групи. Площині пептидних груп розташовані під кутом один до одного (рис. 1-1). Зв’язок між а-вуглецевим атомом і а-ами-ногруппой або а-карбоксильною групою здатна до вільного обертання (хоча […]...