Рестрикція ДНК
Отримати фрагмент геномної ДНК з метою подальшого вивчення можна шляхом рестрикції ДНК. Виділена з клітин органів ДНК піддається розщепленню рестрикційний ендонуклеаза (рестриктазами). Це ферменти бактеріального походження, що беруть участь в розпізнаванні чужорідних молекул ДНК і їх знищення. Кожен такий фермент здатний дізнаватися в будь дволанцюжкової молекулі ДНК специфічну послідовність з 4-12 нуклеотидів. Такі послідовності часто є паліндромний, тобто послідовності нуклеотидів в них читаються в обох напрямках однаково. Дві ланцюга ДНК розрізаються в ділянці впізнавання або поблизу від нього, причому ланцюга в багатьох випадках розрізаються не пряма один проти одного, а навскоси, утворюючи в результаті “липкі” кінці. Ці одноцепочечниє кінцеві ділянки здатні утворювати комплементарні пари основ з будь-якими іншими одноланцюжковий кінцевими ділянками, отриманими за допомогою того ж ферменту.
Відомо більше 500 різних типів рестриктаз, кожна з яких здатна розрізати молекулу ДНК в певному місці – сайті рестрикції. Довжина рестрикційних фрагментів залежить від розподілу сайтів у вихідній молекулі ДНК: чим частіше розташовані сайти, тим утворюються фрагменти коротше. Залежно від частоти розташування сайтів рестрикції виділяють три класи рестриктаз: частощепящіе, узнающие короткі специфічні послідовності довжиною в 4-5 нуклеотидів, среднещепящіе, дізнаються послідовності 6-7 пар нуклеотидів, редкощепящіе, дізнаються послідовності 8-12 пар нуклеотидів.
Після обробки ділянки ДНК декількома рестриктазами утворюються рестрикційні фрагменти, і за допомогою спеціального аналізу можна визначити розташування цих фрагментів відносно один одного в молекулі ДНК, тобто побудувати рестрикційну карту.
Related posts:
- Внутрішньовидова ідентифікація бактерій Рестрикційний аналіз заснований на застосуванні ферментів, що носять назву рестриктаз. Рестріктази являють собою ендонуклеази, які розщеплюють молекули ДНК, розриваючи фосфатні зв’язки не в довільних місцях, а в певних послідовностях нуклеотидів. Особливе значення для методів молекулярної генетики мають рестріктази, які дізнаються послідовності, що володіють центральної симетрією і зчитувати однаково в обидві сторони від осі симетрії. Точка […]...
- Рестрикція: визначення Рестрикція (політика дорогих грошей) – це спеціальний комплекс заходів, основним завданням якого є запуск процесу подорожчання грошових одиниць, а також зменшення росту інфляції. Як правило, до застосування подібних методів вдаються за умови створення складної економічної ситуації – коли відбувається надмірне збільшення загальних витрат. Дії, які необхідні для реалізації політики рестрикції Для реалізації політики подорожчання грошей […]...
- Структура імуноглобулінів Антитіла (імуноглобуліни) – це білки, які синтезуються під впливом антигену і специфічно з ним реагують. Вони складаються з поліпептидних ланцюгів. У молекулі імуноглобуліну розрізняють чотири структури: 1) первинну – це послідовність певних амінокислот. Вона будується з нуклеотидних триплетів, генетично детермінується і визначає основні наступні структурні особливості; 2) вторинну (визначається конформацией поліпептидних ланцюгів); 3) третинну (визначає […]...
- Ферменти реплікації Для реплікації ДНК необхідно роз’єднання і розкручування двох її ланцюгів ДНК. Цю роль виконує дерулаза, яка, рухаючись по молекулі ДНК, забезпечує просування вилки реплікації. Звільнені однонитчатим зони стабілізуються особливим фактором – ДНК протеїн В, який захищає їх від дії Дезоксирибонуклеаза. Закручування однонитчатим ділянок запобігає ферментом гіразу. Синтезу ДНК передує утворення праймера – короткого ділянки РНК, […]...
- Розщеплення фібриногену Плазмін розщеплює пептидні зв’язки фібриногену в певному порядку з утворенням продуктів руйнування, що позначаються як X-, Y-, D – і E-фрагменти. Найбільш чутлива до протеолізу С-кінцева частина Аа-ланцюга, здатна розщеплюватися по залишках 584, 425 і 207. Потім відбувається відщеплення N-кінцевого 42-членного пептиду Вβ-ланцюга. Фібриноген – симетрична структура, але розщеплення за зазначеним залишкам може протікати асиметрично […]...
- Пластичний обмін речовин Суть пластичного обміну полягає в тому, що з простих речовин, що надходять в клітину ззовні, утворюються речовини клітини. Розглянемо цей процес на прикладі освіти найважливіших органічних сполук клітини – білків. У синтезі білка – цьому складному, многоступенчатом процесі – беруть участь ДНК, мРНК, тРНК, рибосоми, АТФ і різноманітні ферменти. Початковий етап білкового синтезу – утворення […]...
- Структура молекули ДНК Молекула ДНК – це біополімер, в складі якого основним мономером або структурною одиницею є нуклеотид. Входять до складу нуклеотидів наступні компоненти: залишок фосфорної кислоти з’єднується з п’ятивуглецевим цукром – дезоксирибозою і вбудовується в азотистих основ. Між собою мономери об’єднуються в довгі ланцюги, утворюючи в кінцевому підсумку подвійні спіралі. З’єднання спіралей один з одним відбувається за […]...
- Отримання генів Гени для клонування можуть бути безпосередньо виділені з генома донорських клітин, отримані шляхом копіювання матричних РНК або за допомогою хіміко-ферментативного синтезу. Для виділення гена, що несе певну функціональну інформацію, з донорської клітини можна використовувати різні методи (наприклад гідродинамічний дроблення або ультразвук). Однак основний інструмент вчених – рестріктірующіе ендонуклеази (рестріктази). Ці ферменти здатні впізнавати специфічні місця […]...
- Матричний характер біосинтезу Пластичний обмін (асиміляція, або конструктивний обмін) – сукупність всіх процесів синтезу складних органічних речовин. Ці речовини йдуть на побудову органел клітини, на створення нових клітин при діленні. Пластичний обмін завжди супроводжується поглинанням енергії. Розглянемо цей процес на прикладі утворення найважливіших органічних сполук клітини – білків. Структура білка визначається ділянкою молекули ДНК, званим геном. Кожні три […]...
- Матричні біосинтези Синтез нерегулярних лінійних полімерів – білків і нуклеїнових кислот – відбувається матричним способом. Тільки таким чином можна точно відтворити послідовність мономерів в полімерній молекулі. При синтезі ДНК матрицями служать кожна з ланцюгів “материнської” молекули ДНК. Вибір потрібних нуклеотидів для будівництва нового ланцюга здійснюється за принципом їх комплементарності. Результатом синтезу є дві подвійні “дочірні” спіралі, кожна […]...
- Послідовність реплікаційного синтезу ДНК 1. ДНК-геліказу розкручує ділянку подвійної спіралі ДНК і розриває водневі зв’язки. Утворюється реплреплікаційна вилка. 2. Дестабілізуючі білки випрямляють ділянку ланцюга ДНК 3. ДНК-топоізомераза розриває фосфодіефірную зв’язок в одній з полінуклеотидних ланцюгів ДНК, знімаючи напругу, що викликається розплітання спіралі і розбіжністю ланцюгів в вилці реплікації. 4. РНК-праймаза синтезує РНК-затравки для дочірньої ланцюга і для кожного фрагмента […]...
- Функції гена-оператора Оператор виконує дві функції: з нього починається синтез іРНК уздовж одного ланцюга молекули ДНК і він (або його продукт) взаємодіє зі специфічною молекулою репрессора. Можна очікувати, що мутації оператора будуть зачіпати одну або обидві ці функції. Мутації оператора, що призводять до припинення або різкого зниження синтезу іРНК, називаються негативними мутаціями оператора. Такі мутації в області […]...
- Транспортні РНК Транспортні РНК [тРНК (tRNA)] беруть участь в процесі трансляції в якості проміжного сполучної ланки між нуклеїновими кислотами і білками. Це невеликі молекули РНК з 70-90 нуклеотидів, які за допомогою своїх антикодон “дізнаються” за рахунок спарювання підстав певні кодони на мРНК. На 3′-кінці (ССА-3 ‘) вони несуть ту амінокислоту, яка згідно генетичним кодом відповідає чергового кодону […]...
- Докази Ген-Ознака Порядок чергування підстав в гені обумовлює послідовність чергування амінокислотних залишків у молекулі білка, кодованого цим геном. Така колінеарність структури гена і структури контрольованого їм білка доведена при проведенні серії схрещувань, в результаті яких була складена карта мутацій в гені 23, детермінує первинну структуру основного білка головки фага Т4. Дослідження первинної структури цього білка показало, що […]...
- Четвертичная структура гемоглобіну Чотири поліпептидні ланцюга, з’єднані разом, утворюють майже правильну форму кулі, де кожна а-ланцюг контактує з двома?-ланцюгами (рис. 1-32). Так як в області контакту між а,-і?,-, a також між а2-і р2-ланцюгами знаходиться багато гідрофобних радикалів, то між цими поліпептидними ланцюгами формується сильне з’єднання за рахунок виникнення в першу чергу гідрофобних, а також іонних і водневих зв’язків. […]...
- Генетика: визначення Генетика – це біологічна наука, що вивчає гени, спадковість та мінливість живих організмів. Перші закономірності генетики людство помітило на зорі свого розвитку. Наприклад, дуже швидко перші люди зрозуміли, чим кращі характеристики рослини, дав насіння (наприклад, злакового), тим краще і якісніше буде урожай, який з нього виросте. Те ж саме стосувалося домашніх тварин – для розмноження […]...
- Генетичний код – коротко Структурною одиницею спадкової інформації є ген. Спадкова інформація організмів зашифрована в ДНК у вигляді певних сполучень нуклеотидів і їх послідовності – генетичного коду. Його властивостями є триплет-ність, специфічність, універсальність, надмірність і неперекриваемость. Крім того, в генетичному коді відсутні розділові знаки. Кожна амінокислота закодована в ДНК трьома нуклеотидами – кодонів, наприклад метіонін закодований кодонів ТАЦ, тобто […]...
- Вторинна структура ДНК Під вторинною структурою розуміють просторову організацію полінуклеотидних ланцюга. Згідно моделі Уотсона-Кріка молекула ДНК складається з двох полінуклеотидних ланцюгів, правозакрученной навколо спільної осі з утворенням подвійної спіралі. Пуринові і піримідинові підстави направлені всередину спіралі. Між пуріновим підставою одного ланцюга і пірімідіновим підставою іншого ланцюга виникають водневі зв’язки. Ці основа – ня складають комплементарні пари. Водневі зв’язки […]...
- Генетичний код та його властивості Генетична інформація поширюється від ДНК до РНК і далі до синтезу білків, в даний час наука не знає прикладів зворотної передачі, крім деяких вірусів і ракових клітин. На одній молекулі ДНК записана інформація про сотні тисяч білків. На сьогодні наука оцінює кількість спадкової інформації людини в 30 тис. Генів. Кожен ген кодує один білок. Інформація […]...
- Біосинтез білка Біосинтез білка – це один з видів пластичного обміну, в ході якого спадкова інформація, закодована в генах ДНК, реалізується в певну послідовність амінокислот у білкових молекулах. Генетична інформація, знята з ДНК і перекладена в код молекули і-РНК, має реалізуватися, тобто проявитися в ознаках конкретного організму. Ці ознаки визначаються білками. Біосинтез білків відбувається на рибосомах в […]...
- Ген і генетичний код Поняття “ген”. Білки – найважливіший компонент живої клітини, вони складають найбільшу за масою частина органічних речовин клітини і забезпечують унікальність її хімічного складу, структурної організації та функціональної активності. Клітини кожного організму мають свій специфічний набір білків. Він відрізняється від набору білків, характерного для клітин іншого організму. Інформація про те, які білки повинні синтезуватися в клітинах […]...
- Синтез білка і РНК Принцип комплементарності лежить також в основі транскрипції. Синтез молекули РНК здійснює фермент – РНК-полімераза. Використовуючи ДНК як матрицю, РНК-полімераза рухається по ній у напрямку від 3 до 5 кінця і будує комплементарних ланцюг. Швидкість транскрипції – приблизно 50 нуклеотидів в секунду. Молекули РНК набагато коротше молекул ДНК, тому кожна молекула ДНК служить матрицею для синтезу […]...
- Молекулярно-генетичні методи Молекулярно-генетичні методи використовуються для вивчення геному, структури і функції генів, послідовності нуклеотидів в гені, генних мутацій. За допомогою аналізу ДНК можна виявити патологічні гени, діагностувати хвороби, визначити захворювання пренатально, виявити гетерозиготное носійство. Вихідним етапом всіх молекулярно-генетичних досліджень є отримання ДНК. Хромосомну ДНК можна виділити з будь-яких ядерні клітин, найчастіше у людини для цієї мети використовують […]...
- Будова нуклеїнових кислот Нуклеїнові (від лат. Nucleus – ядро) кислоти, так само як і білки, – нерегулярні лінійні полімери. Мономерами нуклеїнових кислот є нуклеотиди. Вони виходять при неповному гідродизі нуклеїнових кислот. Повний гідроліз призводить до утворення фосфорної кислоти, цукру-пентози і азотистих основ. Таким чином, нуклеотид складається із залишку фосфорної кислоти, моносахарида і азотистого підстави. Існує два види нуклеїнових […]...
- Ізомерія алкенів Алкени – клас ненасичених вуглеводнів, що містять одну подвійну зв’язок. Починаючи з пропена для алкенів характерна ізомерія. Завдяки будові молекули можливі всі види ізомерії алкенів. Структурна Для алкенів характерні три види структурної ізомерії. Детальніше види з прикладами описані в таблиці. Назва Опис Приклади Вуглецевий скелет Зміни будови вуглецевого скелета характерні гомологів алкенів, починаючи з бутена. […]...
- Структура ДНК Парування підстав, проілюстроване на схемі А, охоплює в молекулі ДНК мільйони ланок. Звичайно, це можливо тільки в тому випадку, якщо полярність обох ланцюгів різна, тобто обидві ланцюга мають протилежні напрямки (див. с. 86). Крім того, обидві ланцюга повинні бути закручені у вигляді подвійної спіралі. Через стеріческіх обмежень, викликаних 2′-ОН-групою залишку рибози, РНК не мoгyт утворювати […]...
- Плазміди Для того щоб молекула чужорідної ДНК не губилася при діленні клітин, вона або повинна бути вбудована в ДНК клітини, або повинна містити спеціальні послідовності, які забезпечують її правильне подвоєння і розбіжність в обидві дочірні клітини при розподілі. Такі послідовності називають “векторами”. Найбільш поширеними векторами є плазміди. Плазміди є кільцеві двуцепочечние молекули ДНК, що складаються з […]...
- Процесинг Клітинна РНК завжди виникає як первинний продукт транскрипції, тобто інформація для її утворення зчитується з ДНК. Після транскрипції РНК піддається процесингу, при якому молекула її дробиться на короткі фрагменти, окремі підстави Модифікуються за допомогою ферментів, а до 3- і 5-кінців приєднаються додаткові нуклеотиди. Продукт транскрипції, гетерогенний по довжині, називається яРНК (гетерогенна ядерна, або про-РНК). Тільки […]...
- Чим відрізняється ДНК від РНК Спочатку людям здавалося, що фундаментальною основою життя є білкові молекули. Однак, наукові дослідження дозволили виявити той важливий аспект, який відрізняє живу природу від неживої: нуклеїнові кислоти. Що таке ДНК? ДНК (дезоксирибонуклеїнова кислота) – це макромолекула, яка зберігає в собі і передає з покоління в покоління спадкову інформацію. У клітинах ж основна функція молекули ДНК – […]...
- Ізомерія – структурні формули Явище, при якому утворюються сполуки однакові за кількістю атомів, але різні за структурою або просторовому розташуванню атомів, називається ізомерією. Ізомери відрізняються фізичними та хімічними властивостями. Ізомерія властива всім органічних сполук. Класифікація Ізомерія буває двох типів: Структурна – з’єднання відрізняються будовою молекул; Просторова – однакові за складом і будовою речовини розрізняються просторовим розташуванням атомів. Опис кожного […]...
- Генетичний код Мова, на якому записана спадкова інформація в нуклеїнових кислотах, носить назви генетичного коду. У результаті багаторічних цілеспрямованих робіт встановлено, що генетичний код характеризується наступними властивостями: він триплетів, виродилися, неперекривающійся, безперервний і універсальний. Триплетність коду означає, що одна амінокислота зашифрована в послідовності трьох нуклеотидів в ДНК або РНК і що зчитування інформації здійснюється трійками (триплетами). Наприклад, […]...
- Організація геному Геном – це сукупність генів, характерних для гаплоїдного набору хромосом даного виду організмів. Уявлення про структуру геному формувалися під впливом даних численних експериментів і змінювалися з часом. Так, в результаті досліджень Бідла і Татума з’явилася гіпотеза “один ген – один фермент”. Однак правильніше сказати “один ген – один білок або один поліпептидний ланцюг”, хоча і […]...
- Характеристика РНК Мономерами РНК є рибонуклеотиди, утворені залишками трьох речовин: пятиуглеродного цукру – рибози; азотистих основ – з пуринових – аденіном або гуаніном, з піримідинових – урацилом або цитозином; залишком фосфорної кислоти. Молекула РНК являє собою нерозгалужений полинуклеотид, що має третинну структуру. На відміну від ДНК, вона утворена не двома, а однією полинуклеотидной ланцюжком. Ланцюга РНК значно […]...
- Властивості генетичного коду – конспект 1. Генетичний код триплетний: 2. Код виродилися. Це означає, що кожна амінокислота кодується більш ніж одним кодоном (від 2 до 6). 3. Код не перекривається. Це означає, що послідовно розташовані кодони є послідовно расположенни – ми триплетами нуклеотидів. 4. Універсальний для всіх клітин (людини, тварин, рослин). 5. Специфічний. Один і той же триплет не може […]...
- Радикал. Функціональна група Під радикалом мається на увазі вуглеводневий заступник (R), який є залишком молекули вуглеводню. Радикали утворюються внаслідок видалення одного або декількох атомів водню з молекули вуглеводню. це: Метил – CH3, Етил – C2H5, Пропив – C3H7. Функціональна група – це певний структурний фрагмент органічної молекули, що відповідає за конкретні хімічні властивості молекули. З’єднання можуть ставитися до […]...
- Третинна структура ДНК ДНК мають форми: лінійна, кільцева, 2-х і 1 ланцгова. Двухланцюгові ДНК з “липкими” кінцями можуть утворювати кільце, яке далі ковалентно зшивається по сахарофосфатний ланцюга за допомогою ДНК-лігази. Третинна структура ДНК у еукаріотів відрізняється тим, що багаторазова спирализация ДНК супроводжується утворенням комплексів з білками. 46 хромосом (хроматид) людини організовані в 23 пари. Середня довжина хромосоми становить […]...
- Олігосахарид з імуноглобуліну IgG Багато білки зовнішньої сторони плазматичних мембран і більшість секретується білків містять олігосахаридних ланцюги, які синтезуються в процесі посттрансляционной модифікації в ЕПР і в апараті Гольджі (див. С. 226). Цитоплазматичні білки, навпаки, рідко бувають глікозовані. Глікопротеїни можуть містити до 50% вуглеводів, але, як правило, в молекулі переважає білкова частина. Як приклад на схемі представлена структура олігосахариду […]...
- Класифікація мутацій Єдиної класифікації мутацій не існує, і поділ спадкових змін на групи здійснюється за багатьма показниками. За характером зміни спадкового матеріалу мутації підрозділяються на генниье, хромосомниье і геномниье. Залежно від напрямку мутації бувають прямими (з дикого типу виникає мутантний) і зворотними (реверсії), коли мутація призводить до раніше існуючого дикому типу. При цьому важливо пам’ятати, що строго […]...
- Зберігання генетичної інформації і транспорт речовин У про – і еукаріот генетична інформація записана в послідовності нуклеотидів молекул ДНК. У прокаріотів вся ДНК клітини представлена однією кільцевою молекулою. Молекули ядерної ДНК еукаріот лінійні, і їх кількість у різних видів організмів може відрізнятися. Ці молекули ДНК мають різні розміри і різну послідовність нуклеотидів, тобто кожна з них несе свій певний набір генетичної […]...
- Транскрипція і трансляція білка Синтез білків – це складний багатоетапний процес, основними його етапами є: Транскрипція – зчитування і копіювання гена в структуру інформаційної РНК; Трансляція – використання і-РНК як матрицю, по якій збирається молекула білка. Транскрипція відбувається в ядрі – фермент РНК-полімераза приєднується до спеціальній ділянці ДНК, який називається “промотор” і починає рухатися по ньому. При цьому подвійна […]...