Методи виділення мікроорганізмів

Крапельний спосіб Лінднера. Суспензію дріжджів розбавляють рідким суслом до концентрації 100 клітин в 1 мл і стерильним креслярським пером наносять найдрібніші клітини на незнежирених покривне скло, простерилизованное фламбирования в полум’ї газового пальника. Крапельки розташовують у певному порядку, зазвичай по п’ять крапель в два ряди, т. Е. Всього по 10 крапель на склі. Потім швидко перекидають скло над вологою камерою, яку запечатують мінеральної мастилом. Всі краплі негайно дивляться під мікроскопом і відзначають ті з них, які містять по одній клітці. Якщо всі краплі містять по кілька кліток, то збільшують розбавлення суспензії та процедуру повторюють. Після трьох – чотирьох денного інкубування, коли відмічені клітини утворюють мікроколонії, останні переносять стерильною голкою або смужкою стерильною фільтрувального паперу в рідку середу і розмножують.

Метод Лінднера у видозміні Надсона. Чисте покривне скло проводять тричі через полум’я пальника і краю його обводять мастикою. На центральну частину наносять краплю прозорого середовища з 10% желатини або

0,5% агару. В теплу і ще не застиглу середу вносять голкою суспензію такого розведення, щоб в краплю потрапило лише кілька клітин. Скло поміщають у вологу камеру і розглядають препарат при малому збільшенні мікроскопа.

Знаходять орієнтири, якими можуть бути суспензії, бульбашки повітря або дефекти скла, і викреслюють карту з розташованими по відношенню до орієнтирів поодинокими клітинами дріжджів. Через кожні 10 – 20 годин препарат повторно досліджують на предметному склі і під контролем ока при малому збільшенні мікроскопа переносять голкою матеріал у пробірки.

Метод Лінднера, спрощений Вунковічем. Видозміна Вунковічем методу Лінднера зводиться до того, що крапельки суспензії, що містять 3 – 4 клітини, знімають петлею, якій попередньо захоплюють стерильне середовище, і переносять штрихом на поверхню щільного середовища. Через деякий час з’являються мікроколонії, число яких на одному штриху повинна відповідати кількості вихідних клітин у зазначеній крапельці.

З цих колоній пересівом виділяють чисті культури. Таким способом можна отримати кілька одноклітинних культур за короткий час.

Виділення суперечка дріжджів за допомогою мікроманіпулятора. К використанню мікроманіпулятора вдаються головним чином при необхідності ізолювати суперечки з асков, оскільки вегетативні клітини легко пошкоджуються при мікроманіпулірованіі.

Аски розривають або механічно дотиком голок мікроманіпулятора, або заздалегідь обробляючи суспензію препаратом ферментів (наприклад, з травного тракту виноградної равлики Helix pomatia), лізуючого клітинну стінку дріжджів.

Для роботи з мікроманіпулятором потрібні спеціальні мікроголки і вологі камери. Методика їх виготовлення і деталі роботи при витяганні аскопор дріжджів у посібниках з генетики та селекції дріжджів.


1 Star2 Stars3 Stars4 Stars5 Stars (1 votes, average: 5.00 out of 5)

Методи виділення мікроорганізмів